PCR en la Neumonía

Tema: Comparación de muestras de esputo y muestras de aspirina nasofaríngea y de los objetivos de genes de PCR lytA y Spn9802 para PCR cuantitativa para la detección rápida de neumonía neumocócica.

Objetivo: Comparar las muestras de esputo y aspirado nasofaríngeo (NpA) y el gen de PCR se dirige a lytA y Spn9802 en ensayos de PCR cuantitativa (qPCR) para la detección rápida de la etiología neumocócica en la neumonía adquirida en la comunidad (NAC).

Muestra: Esputo y hemocultivo

Tipo de ácido nucleico que será extraído: ADN

Extracción de ADN

• Lisis: Kit de Aislamiento de Ácido Nucleico I MagNAPure Compact con un robot MagNAPure Compact (Roche Diagnostics , Mannheim, Alemania), con aproximadamente 5 minutos de tiempo práctico por muestra.
• Purificación: Kit I MagNAPure Compact.
• Separación: Kit I MagNAPure Compact.

Genes a amplificar: lytA y Spn9802.

Números de pares de bases: 352 pares de bases en M. pneumoniae, 333 pares de bases en C. pneumoniae y 233 pares de bases en L. pneumophila.

Tipo de PCR: PCR cuantitativa (qPCR).

Visualización: Electroforesis.

• Desnaturalización: Técnica de Mejuto y colaboradores.
• Hibridación: LightCycler FastStart sondas de hibridación.
• Extensión: Técnica de Mejuto y colaboradores.
• Número de ciclos: Técnica de Mejuto y colaboradores.

Referencias bibliográficas

1.Stralin K, Herrmann B, Abdeldaim G, Olcen P, Holmberg H, Molling P. Comparison of Sputum and Nasopharyngeal Aspirate Samples and of the PCR Gene Targets lytA and Spn9802 for Quantitative PCR for Rapid Detection of Pneumococcal Pneumonia. Journal of Clinical Microbiology [Internet]. 2013 [cited 3 December 2017];52(1):83-89. Available from: http://jcm.asm.org/content/52/1/83.full